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注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
CNP-AfuBOC-L-色氨酸 98%胺苯磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，95%

Potassium sorbateN-叔丁氧羰基-L-甲硫氨酸 97%線磷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，96%

Calcium DL-malateN-叔丁氧羰基-L-甲硫氨酸 99%標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=3%,溶劑:酮

MU-Gal[Hyp³]Bradykinin  ≥97% (HPLC)標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=5%,溶劑:酮

MU-α-GalBOC-L-天冬酰胺 BR異標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%（）

MUDO-叔丁基-L-蘇氨酸甲酯鹽酸鹽 98%異標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5%（）

1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-β-D-ribofurase1-芐基D-谷氨酸酯 98%a-硫丹標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%,基體:苯

D-Glucuronic acidBoc-L-氨酸 N-丁二酰亞胺酯  BRa-硫丹標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5%

Sodium D-glucuronate(R)-N-叔丁氧羰基-3-代氨酸甲酯  BRβ-硫丹標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%

D-GlucuroneBOC-D-精氨酸鹽酸鹽 BRβ-硫丹標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=5%

SteviosideBoc-Arg(Mts)-OH·CHA BR硫丹 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%（）

Calcium PyruvateBOC-硝基-L-精氨酸 99%標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%（）

Magnesium L-lactate hydrateN-叔丁氧羰基-N'-甲苯磺酰基-L-精氨酸 B標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%（）

Potassium L-lactateBOC-對(duì)磺酰-D-精氨酸  98%酮中乙嘧硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%

Zinc citrate叔丁氧羰基-N-beta-三苯甲基-L-天門冬酰胺  98%酮中乙嘧硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=2%

Iron(II) D-gluconate dihydrateBOC-L-天門冬酰胺 4-酯 98%烯炔菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，97%

乙(工業(yè)級(jí))Pim-1 (C93F2) Rabbit mAbMRP9/ABCC12  多藥耐藥相關(guān)蛋白9抗體

異辛烷(ACS,≥99.0%)Pim-1 (C93F2) Rabbit mAbMRP8+MRP14  多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體

乙(ACS, ≥99.5%)PKG-1 (C8A4) Rabbit mAbMRP8/ABCC11  多藥耐藥相關(guān)蛋白8抗體

2-(叔丁氧羰基氧亞氨基)-2-苯乙(99%)Mic-1 (Y60) AntibodyMRP7/ABCC10  多藥耐藥相關(guān)蛋白7抗體

1,2-苯二乙()HER2/ErbB2 (M45) AntibodyMRP5/ABCC5  多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體

2-溴-1,3,5-三異基苯(96.0 %)TBR1 (D6C6X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)MRP4/ABCC4  多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體

2,2'-雙(三氟甲基)二氨基聯(lián)苯(98.0%)Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) AntibodyMRP3  多藥耐藥相關(guān)蛋白3抗體

1,3-二咔唑-9-基苯(98%)Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) AntibodyMRP2  多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體

苯(AR,≥99.5%)p53 (D2H9O) Rabbit mAb (Rodent Specific)MRP1/ABCC1  多藥耐藥相關(guān)蛋白1抗體

苯(CP,≥99%)Flotillin-1 AntibodyMRGX1/MRGPRC/SNSR  G蛋白偶聯(lián)受體MRGX1抗體
耐萬(wàn)古霉素腸球菌PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human complex edprostate specific antigen,cPSA ELISA Kit*

人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒 英文名稱：Human replication protein A,RPA-70 ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人富組蛋白(HTN5)ELISA試劑盒英文名稱：Human histatin 5,HTN5 ELISA Kit*

人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA試劑盒英文名稱：Human Calretinin,CR ELISA Kit*

人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒英文名稱：Human voltage-gated calcium channel,VGCC ELISA Kit*

人鈣聯(lián)蛋白(CNX)ELISA試劑盒 英文名稱：Human calnexin，CNX ELISA Kit*小鼠核因子kb（NF-kb）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠漢坦病毒（HV）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒      組裝/原裝